❶ 細胞復甦步驟和注意事項
博凌科為解答：【材料】
1.常規細胞培養儀器設備
恆溫水浴振盪器。
2.培養液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亞碸（DMSO）【操作程序】
1.細胞實驗室進行常規消毒，紫外照射40min以上。
2.培養液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恆溫水浴箱370C預熱20min，備用。
3.二甲基亞碸（DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，備用。
4.從液氮保存罐中取出凍存管，立即放入400C水浴中，快速搖晃，直至凍存液完全融化。
5.將細胞懸液移入15ml離心管，緩慢加入4ml培養液，離心（1000r/min，5min）。
6.用培養液懸液混懸沉澱細胞，調整細胞濃度，方培養箱中培養。
7.記錄復甦日期。【注意事項】
1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。
2.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞碸（DMSO）對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞碸對細胞的毒副作
較大，因此，必須在1-2min內使凍存液完全融化。如果復甦溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞碸（DMSO）最好選擇進口產品。
3.離心前須加入少量培養液。細胞解凍後二甲基亞碸濃度較高，注意加入少量培養液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。
4.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍後的細胞懸液直接吹打均勻後分裝到培養瓶中進行培養，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除
DMSO，去除死細胞，這個是標准流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，
死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞碸（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心後的液
體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行復甦，結果無有異常。
5.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養液，而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。
6.復甦細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復甦1管細胞一般可分裝到1-2隻培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利於細胞的貼壁。
7.加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養基的太少，那麼DMSO的濃度就會比較大，就會影響
細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小於0.5%的時候對一般細胞沒有什麼影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是
10％DMSO的話那麼加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度。
❷ 新鮮組織取到後如何冷存新鮮組織取到後想先冷存起來以後用的時候再取出來進行細胞培養。用剪刀剪後加入凍
將組織在篩網上研磨，將細胞濾過，再按照DMSO的方式液氮凍存。不要將整個組織塊凍存。
❸ 細胞的凍存與復甦要注意什麼 – 手機愛問
細胞凍存與復甦步驟注意事項
一、原理
在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
細胞復甦時速度要快，使之迅速通過細胞最易受損的－5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。
目前常用的保護劑為二甲亞碸（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。
二、操作步驟
（一）凍存
1、消化細胞（同實驗二），將細胞懸液收集至離心管中。
2、1000rpm離心10分鍾，棄上清液。
3、沉澱加含保護液的培養，計數，調整至5×106/ml左右。
4、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。
5、將凍存管口封嚴。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴，否則復甦時易出現爆裂。
6、貼上標簽，寫明細胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。
7、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鍾〕→冰箱冷凍室（30分鍾）→低溫冰箱（－30℃ 1小時）→氣態氮（30分鍾）→液氮。
注意：操作時應小心，以免液氮凍傷。液氮定期檢查，隨時補充，絕對不能揮發干凈，一般30立升的液氮能用1～1.5月。
（二）復甦
1. 細胞實驗室進行常規消毒，紫外照射40min以上。
2. 培養液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恆溫水浴箱370C預熱20min，備用。
3. 二甲基亞碸（DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，備用。
4. 從液氮保存罐中取出凍存管，立即放入400C水浴中，快速搖晃，直至凍存液完全融化。
5. 將細胞懸液移入15ml離心管，緩慢加入4ml培養液，離心（1000r/min，5min）。
6. 用培養液懸液混懸沉澱細胞，調整細胞濃度，方培養箱中培養。
7. 記錄復甦日期。
【注意事項】
1. 取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。
2. 凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞碸（DMSO）對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞碸對細胞的毒副作 較大，因此，必須在1-2min內使凍存液完全融化。如果復甦溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞碸（DMSO）最好選擇進口產品。
3. 離心前須加入少量培養液。細胞解凍後二甲基亞碸濃度較高，注意加入少量培養液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。
4. 離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍後的細胞懸液直接吹打均勻後分裝到培養瓶中進行培養，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除 DMSO，去除死細胞，這個是標准流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大， 死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞碸（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心後的液 體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行復甦，結果無有異常。
5. 細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養液，而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。
6. 復甦細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復甦1管細胞一般可分裝到1-2隻培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利於細胞的貼壁。
7. 加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養基的太少，那麼DMSO的濃度就會比較大，就會影響 細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小於0.5%的時候對一般細胞沒有什麼影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是 10％DMSO的話那麼加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度。
❹ 醫學生實驗用什麼樣的手套，戴手套都干什麼
第一是不傳染，第二不交叉感染，第三手套是滅菌手套很薄，第四帶手套一般是做細胞分析或活體手術。
❺ 掉在液氮罐里的細胞凍存管怎麼取出來
剛剛試了一下，反扣一個50ml離心管可以，就是拿出來稍微費點勁，小提桶有點歪。
❻ 細胞凍存的操作步驟
（一）儀器
1. 凈化工作台
2. 離心機
3. 恆溫水浴箱
4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃）
5. 倒置相差顯微鏡
6. 培養箱
7. 液氮冰箱
（二）玻璃器皿
1. 吸管（彎頭、直頭）
2. 培養瓶
3. 玻璃瓶（250ml、100ml）
4. 廢液缸
（三）塑料器皿
1. 吸頭
2. 槍頭
3. 膠塞
4. 移液管（10ml）
5. 15ml離心管
6. 凍存管（1～2ml）
（四）其他物品
1. 微量加樣槍
2. 紅血球計數板
3. 記號筆
4. 醫用橡皮膏
5. 移液槍
（五）試劑
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. 培養液
4. 雙抗（青黴素、鏈黴素）
5. 胰蛋白酶（0.08%）
6. 1NHCl
7. 7.4%NaHCO3
8. DMSO（分析純）或無色新鮮甘油 （一）細胞凍存
1. 配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
（二） 細胞復甦
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，並不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管並滴加10倍以上培養液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。 1．從增殖期到形成緻密的單層細胞以前的培養細胞都可以用於凍存，但最好為對數生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養液；
2．將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；
3．凍存和復甦最好用新配製的培養液。
❼ 細胞凍存的操作步驟是什麼
1、配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2、取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3、去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4、離心1000rpm，5min；
5、去除胰蛋白酶，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6、細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7、在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8、凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
注意事項
1、從增殖期到形成緻密的單層細胞以前的培養細胞用於凍存，最好為對數生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養液；
2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；
3、凍存和復甦最好用新配製的培養液。
❽ 細胞培養常用器材有哪些
1. 超凈工作台
目前絕大部分細胞實驗室使用超凈工作台實現無菌操作，具有操作簡單、安裝方便、佔用空間小且凈化效果很好。安徽人和凈化為您介紹兩種主要超凈工作台-側流式（垂直式）和外流式（水平層流式）。工作原理一般是將室內空氣經粗過濾器初濾，由離心風機壓入靜壓箱，再經高效空氣過濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。
（1） 側流式工作台：空氣凈化後的氣流由左或右側通過工作檯面流向對側，也有從上向下或從下向上流向對側，形成氣流屏障保持工作區無菌，工作台結構為封閉式；
（2） 外流式工作台：凈化後的空氣面向操作者流動，因而外方氣流不致混入操作，工作台結構為開放式，但進行有害物質實驗操作對操作者不利。超凈工作台應需要定期請有關部門檢查潔凈度，符合要求的超凈工作台其潔凈度應達到100級，用塵埃粒子計數儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數量不應超過3.5個/L；空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s；細菌菌落數平均<1個，根據無菌狀況必要時需要置換過濾器。
2. 顯微鏡
倒置式顯微鏡是細胞培養實驗室日常工作常規必備設備，主要用於日常了解細胞的生長情況並觀察有無污染發生。如資金允許，建議選用配置有照相系統的高品質相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等，可隨時拍攝並記錄細胞生長情況。
3. 培養箱
體外培養的細胞和體內細胞一樣，需要在恆定的溫度下生存，一般最適生長溫度為37℃，溫差變化不應超過±0.5℃。溫度升高2℃時，變不利於細胞生存，溫度達到40℃以上細胞將很快死亡。因此，可精確控溫的恆溫培養箱、CO2培養箱是最佳選擇。
（1） 恆溫培養箱：應選隔水式或晶體管式自控溫培養箱，此類培養箱靈敏度高，溫度控制較穩定。一般的恆溫培養箱價格較便宜，其缺點是只宜於作密閉式培養。
（2） CO2培養箱：目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優點是能夠提供進行細胞培養時所需要的一定量的CO2（常用濃度為5％），易於穩定培養液pH，適用於開放或半開放培養。使用培養瓶時，為使培養瓶內與外界保持通氣狀態，可將瓶蓋略微旋松，為避免細胞被污染，使用這種培養方式時，培養箱內空氣必須保持清潔，需定期用紫外線照射或酒精消毒，同時培養箱內應放置盛有無菌蒸餾水的水槽，防止培養液蒸發，保持箱內相對濕度在100%。
（3） 細胞培養耗材：培養細胞的器皿可用培養皿、培養板或培養瓶。
4. 烘箱（乾燥箱）
用於細胞培養的一些器械、器皿必須烘乾後才能使用，玻璃器皿等須乾熱消毒。乾熱消毒時，烘箱內溫度一般要達到160℃以上，通常使用鼓風式烘箱。其優點是溫度均勻、效果較好，缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫後鼓風而應鼓風與升溫同時開始，至100℃時，停止鼓風。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦，燒焦的碎屑可影響細胞的生長。消毒後不能立即打開箱門，以免驟冷導致玻璃器皿破裂，應等溫度自然下降至100℃以下後可開門。
5. 水純化裝置
細胞培養對水的質量要求較高，細胞培養、細胞培養相關液體的配製用水以及清洗細胞培養器皿用水都必須事先經過嚴格的純化處理。目前有多種純化方法相結合，可使普通水純化為純水和超純水的純水裝置使用非常靈活方便，可掛壁式、台式、可配儲水箱、也可直接用分液槍、還可根據各類實驗用水要求選擇配置殺菌功能，有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，更有可有效去除掉熱源、內毒素的超濾型純水裝置。
6. 冰箱
細胞培養實驗室必備設備，應專用，不得存放易揮發、易燃燒等對細胞有害的物質，且應保持清潔。一般包括普通冰箱、低溫冰箱和超低溫冰箱。
普通冰箱：儲存培養液、生理鹽水、Hanks液試劑等培養用的物品，可短期保存組織樣本。
-20℃低溫冰箱、超低溫冰箱：用於儲存需要冷凍以保持生物活性以及需長時期存放的制劑，如酶、血清等。
7. 細胞冷凍儲存器
儲存器常用的液氮容器，根據使用需要分為不同類型和規格。選擇液氮容器時需要考慮三個因素：容積大小、取放使用方便、液氮揮發量。液氮容器的大小一般在25-500L，可以儲存1ml的凍存管250-15000個左右。液氮溫度最低文帝可達-196℃，使用時應注意避免凍傷。由於液氮易揮發，需注意觀察剩餘液氮量，及時補充，避免液氮不足使細胞受損或死亡。目前有許多智能型細胞冷凍儲存器可供選擇，可配置有電子控制器的液氮儲存器，實現凍存自動化；並可監測液氮水平和樣品溫度，確保樣品溫度始終處於設定溫度點；可配置報警系統，設置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報警；同時具備熱氣體旁路系統，防止高於-130℃的暖空氣進入液氮罐，從而更有效地保護樣品，防止容器內升溫。另外，可選擇液氮供應罐通過連接管給儲存罐補充液氮，保證樣品安全。
8. 離心機
細胞培養時，通常使用離心機制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌和收集細胞。一般常規配置4000rpm台式離心機；若要做細胞沉降，需要使用80-100G離心力，因為離心力過大會損傷細胞。根據不同要求，有大容量、可調溫度離心機、高速離心機和低溫冷凍離心機等更多功能離心機可選擇。
9. 天平
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精確度一般為0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根據取樣量量和精度要求選擇合適的天平：取樣量大於100mg宜選用精確度0.1mg的天平；取樣量100-10mg，選用精確度0.01mg的天平；取樣量10mg宜選用精確度0.001mg的天平。天平需要定期校準，可選擇有自動校準功能的天平，方便維護。天平使用需要注意清潔，避免腐蝕性粉末、液體直接接觸稱量台。答案來自
❾ 做解剖的醫用手套用什麼牌子比較好
乳膠的比較好，我們上課大部分用的是乳膠手套，因為感覺比較好，而且厚度也很好，用完後受傷的味道比較少，以前用其他手套受傷會有很惡心的味道，不過手套價格有點貴了，還有每次都要換一雙。用丁晴一次性手套好於天然乳膠手套，天然乳膠手套有蛋白過敏現象。
❿ 請細胞生物學實驗要帶手套嗎，如果要，要帶什麼yang
低級的。就像學生實驗，不用帶，但必須在進去之前洗干凈，在門口的時候用酒精消毒在能靜
一般的，要消毒，也要帶，而且是用特製有消毒手套，甚至全身防禦服在能進入，而且出去也要消毒
看看生化危機就能想像了
細胞實驗必須在專門的實驗室做，（還分安全級數的）
細胞實驗是一種很精密的實驗，容易受很多因素影響，比如:外來細菌入侵干擾，手上的如污染物等，只要有一點誤差，是研究可能失敗。
而且細胞實驗的時候，有的時候會接觸危險的物品和生物，不僅要保護自己，也要防止外泄。